Распространённость неинтегрированных плазмид с�
Суббота, 03.12.2016, 03:18
Приветствую Вас Гость | RSS
Мой сайт
Меню сайта
Статистика

Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0
Форма входа
Поиск
Календарь
«  Февраль 2013  »
ПнВтСрЧтПтСбВс
    123
45678910
11121314151617
18192021222324
25262728
Архив записей
Друзья сайта
  • Официальный блог
  • Сообщество uCoz
  • FAQ по системе
  • Инструкции для uCoz
  • Главная » 2013 » Февраль » 1 » Распространённость неинтегрированных плазмид с�
    11:06
     

    Распространённость неинтегрированных плазмид с�

    Эта работа опубликована в сборнике статей с материалами трудов 2-ой международной телеконференции "Проблемы и перспективы современной медицины, биологии и экологии". Название сборника "Фундаментальные науки и практика Том 1, №2"

    Скачать сборник целиком или по частям можно ЗДЕСЬ

    ФГУН Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микрибиологии Роспотребнадзора, (г.Казань)

    В последнее десятилетие проблема внутрибольничных инфекций (ВБИ) приобрела исключительно большое значение для всех стран мира. Это обусловлено, прежде всего, значительным ростом числа госпитальных штаммов микроорганизмов, обладающих устойчивостью к широкому кругу антимикробных препаратов. Среди возбудителей ВБИ одно из первых мест принадлежит микроорганизмам рода Staphylococcus, наиболее патогенным представителем которого является S. aureus. Эпидемиологическая ситуация осложняется в связи с широким распространением в стационарах, а также появлением и во внебольничной среде, клинических изолятов S. aureus, устойчивых к оксациллину (ORSA или MRSA). MRSA способны вызывать разнообразные клинические формы внутрибольничных инфекций, включая наиболее тяжелые, такие как: бактериемия, пневмония, синдром септического шока, септический артрит, остеомиелит и другие, которые требуют длительного и дорогостоящего лечения. Показано, что рост частоты ВБИ, наблюдаемый в стационарах различных стран мира, обусловлен распространением эпидемических штаммов MRSA, многие из которых способны вырабатывать пирогенные токсины - суперантигены, подавляющие иммунный ответ на S. aureus. Совершенствование методов эпидемиологического и микробиологического мониторингов, направленных на выявление эпидемически значимых штаммов, приобретает все более актуальное значение.
    MRSA имеют свои биологические особенности. Во-первых, уникальный биохимический механизм резистентности к метициллину обеспечивает им устойчивость ко всем полусинтетическим пенициллинам и цефалоспоринам. Во-вторых, такие штаммы способны "аккумулировать" гены антибиотикорезистентности и поэтому нередко обладают устойчивостью к нескольким классам антимикробных препаратов одновременно, тем самым значительно затрудняя лечение пациентов. И, наконец, в-третьих, такие штаммы способны к эпидемическому распространению, вызывают тяжелые формы внутрибольничных инфекций.
    Многие эпидемические штаммы MRSA продуцируют пирогенные токсины, обладающие суперантигенной активностью (PTSAgs). Они являются причиной или осложняют патогенез острых и хронических заболеваний человека. Гены, детерминирующие синтез PTSAgs, могут находиться на мобильных генетических элементах (бактериофагах, "островах патогенности") в составе хромосомы MRSA.
    Устойчивость метициллинрезистентных штаммов золотистого стафилококка (MRSA) к бета-лактамным антибиотикам обусловлена продукцией дополнительного пенициллинсвязывающего протеина - ПСБ-2', отсутствующего у чувствительных микроорганизмов. Синтез ПСБ-2' кодируется геном mecA, расположенным на хромосоме S. aureus, в специфической области, обнаруживаемой только у метициллинрезистетных штаммов стафилококка - mec ДНК. Mec ДНК представляет новый класс мобильных генетических элементов, который получил название стафилококковая хромосомная кассета mec (Staphylococcal chromosomal cassette mec = SCCmec). Выявлено существование 4 типов SCCmec, различающихся как размерами (от 21 до 66 т.п.н.), так и набором генов, составляющих данные кассеты. Уникальность метициллинрезистентности заключается также и в существовании феномена гетерорезистентности, суть которого состоит в том, что в условиях инкубации при 37°C не все клетки популяции проявляют устойчивость к оксациллину.
    Большинство штаммов Staphylococcus spp. содержат в геноме плазмидную ДНК. Размер плазмид, содержащихся в геноме штаммов стафилококков, составляет от 1 до 60 kb. Плазмиды, как правило, содержат гены, обуславливающие устойчивость бактериальных клеток к антибактериальным препаратам, тяжелым металлам, антисептикам и четвертичным аминам. Некоторые плазмиды несут гены кодирующие ферменты и гены, ответственные за процесс конъюгации. Изоляты S. aureus, выделяемые из клинического материала, а также от амбулаторных пациентов очень часто содержат более одной плазмиды. По классификации предложенной Novick R.P. выделяют три класса стафилококковых плазмид, которые различаются по массе и копийности в бактериальной клетке. Так к I классу относят небольшие (1-5 kb), мультикопийные (15-60 копий на клетку) плазмиды, которые вносят детерминанты первичной устойчивости к тетрациклину (например рТ181, рТ127), хлорамфениколу, стрептомицину, эритромицину и другим антибактериальным препаратам. К II классу относят средние по величине (15-30kb), низкокопийные (от 4-6 копий на клетку) плазмиды, с которыми у золотистого стафилококка связана комбинированная устойчивость к -лактамным антибиотикам, а также к макролидам и различным неорганическим ионам. К III классу относят большие стафилококковые плазмиды, порядка 30-60 kb, в основном, содержат детерминанты конъюгативного переносчика (tra) и несколько дополнительных детерминант комбинированной устойчивости к гентамицину, пенициллину и четвертичным аминам. В связи с недостаточной изученностью распространённости циркуляции неинтегрированных плазмид, среди клинических изолятов стафилококков в нашей работе проведено исследование циркуляции неинтегрированных плазмид у клинических штаммов стафилококков (S. aureus, S. epidermalis), выделенных со слизистой и кожи пациентов с различными аллергическими заболеваниями (атопический дерматит, аллергический ринит, атопическая бронхиальная астма).
    Материалы и методы. Исследовано 29 штаммов S. aureus (с кожи и слизистой носа) и 25 штаммов S. epidermidis (с кожи) полученных из коллекции лаборатории микробиологии ФГУН КНИИЭМ. Все штаммы были изолированы и идентифицированы от амбулаторных пациентов с атопическим дерматитом и аллергическим ринитом за последние 5 лет. Неинтегрированную плазмидную ДНК (пДНК) получали по протоколу к коммерческому набору для выделения пДНК AxyPrep Plasmid Miniprep Kit (Axygen biosciences, USA) из бактериальной биомассы, которую отделяли от жидкой питательной среды центрифугированием при 12,000 rpm в течение 1 минуты. Элюцию очищенной пДНК с сорбента проводили деионизированной водой. Полученные препараты пДНК электрофорезировали в 0,8% агарозном геле. Плазмидные профили визуализировались трансиллюминатором ECX-15M, Vilber Lormat, Франция, при УФ облучении геля, в качестве интерколирующего красителя использовали бромистый этидий и фотодокументировались видеосистемой «Gel Imager 2». Вычисление молекулярной массы проводили по стандарту молекулярной массы с применением набора из двух маркёров: 1Kb Ladder DNA marker (300 bp-10000 bp), и 100bp Ladder DNA marker (100 bp-3000 bp) «Axygen biosciences». Фенотипическую устойчивость клинических штаммов стафилококков к антибактериальным препаратам оценивали на основании дискодиффузионного метода согласно регламентированному Федеральным центром Госсанэпиднадзора Минздрава РФ, 2004 г. (МУК 4.2.1890-04).
    Результаты и обсуждение. В результате работы нами проанализировано 54 штамма стафилококка. У 30,0% были выделены плазмиды размер, которых составил 10.000 bp (рис.1). Данный тип плазмид был отнесён нами ко второму классу, как низкокопийные средние по величине плазмиды. Штаммы бактерий (S. aureus – 10 и S. epidermidis - 6), содержащие эти плазмиды, в отличие от плазмидо-негативных штаммов, характеризовались полирезистентностью к оксацилину, -лактамным антибиотикам и азитромицину. Все штаммы S. aureus, несущие данные плазмиды фенотипически являлись метицилин-резистентными штаммами.

    Image

    Рис.1. М-маркер (1Kb Ladder DNA marker); 1-штамм S. aureus № 62; 2-штамм S. Aureus № 280


    Литература.

    1. Методические рекоминдации. Метициллинрезистентные Staphylococcus aureus – возбудители внутрибольничных инфекций: идентификация и генотипирование. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Гос.учреждение НИИМЭ им.Н.Ф. Гамалеи РАМН. Г.Москва, 2006г.
    2. R.P.Novick. Genetic systems in Staphylococci. Now York. 1990.
    3. Konrad Plata. Staphylococcus aureus as infections agent, overview of its biochemistry and molecular genetics of its pathogenicity. 2009.

    Просмотров: 167 | Добавил: thiseed | Рейтинг: 0.0/0
    Всего комментариев: 0
    Copyright MyCorp © 2016Создать бесплатный сайт с uCoz